紫花苜蓿（Medicago sativaL-）是世界上分布范围最广的豆科牧草，也是我国种植面积最大的人工牧草口]。黑龙江省地处高寒地区，种植紫花苜蓿既要考虑当年的产草量，又要兼顾苜蓿品种能否安全越冬，因此在选育品种和引种驯化过程中，品种的抗寒性是考虑的重要因素之一[2]，苜蓿生产中低温越冬问题是制约苜蓿生长和利用的关键。国外苜蓿种植的主要国家有选择地培育苜蓿品种的工作始于20世纪初期，育种的主要目标是提高品种的耐寒性。杂种优势育种是作物育种中富有成效的一种方法，我国已通过审定登记的苜蓿育成品种中，通过杂交育种方法育成的新品种共7个，占育成新品种数的30.43%，它们获得了双亲的优良性状，比原亲本具有更高的增产潜力及更好的越冬性能。杂交育种在苜蓿育种中将发挥越来越重要的作用。目前肇东苜蓿(Medicago sativaI。.cv. Zhaodong)越冬性好，但是产量低，在黑龙江地区引进的国外品种丰产性好，但是稳定性弱、越冬性差，一般超过3 a就死掉90%，因此为了获得抗寒、高产、稳定的苜蓿新品种，利用在黑龙江地区越冬性较好的地方品种肇东苜蓿和国外引进的3种高产苜蓿：美国苜蓿WL323、保加利亚苜蓿Pleven6、俄罗斯苜蓿 Beza87分别进行正反种间杂交，对杂交亲本的花粉活性进行检测及杂交结荚率等数据进行统计分析，为苜蓿杂交育种亲本选配提供理论支撑，同时为获得杂交苜蓿新种质奠定了基础。

    1材料与方法

    1.1试验地概况  

    试验在黑龙江省农业科学院草业研究所试验地进行，地处N45.2。，E122.6。；海拔169 m,最高气温38℃，最低气温--30℃，无霜期139 d左右，年平均风速3.3 m.S_1，年平均降水量569.1 mm，属中温带大陆性季风气候，年平均日照时数2670 h，年总辐射量111.55 kcal-cm-2，≥10℃年活动积温2887℃，土壤为黑土。

    1.2  供试品种及杂交组合

    杂交亲本为黑龙江地方品种肇东苜蓿、美国苜蓿WL323、保加利亚苜蓿Pleven6、俄罗斯苜蓿 Beza87，现均保存于黑龙江省农业科学院草业研究所种质资源库，分别以肇东苜蓿为亲本与其它3个国外苜蓿进行正反交，共6个杂交组合。

    1.3试验时间及方法

    1.3.1  杂交  2007年将试验品种定植于黑龙江省农业科学院试验地，2009年6月22日～7月10日在供试的苜蓿试验田盛花期，对单花发育的第III期花蕾进行人工去雄、套袋隔离，第二天10：00～14：00采取新鲜的苜蓿花粉进行人工授粉、套袋、挂标签，并写明父母本、去雄日期和杂交日期等信息，每个杂交组合做100朵小花，3次重复，8月份统计各组合结荚率情况。

    1.3.2  苜蓿花粉活性检测  在同一亲本上选择10朵花，利用离体萌发法对亲本的成熟花粉进行花粉活性检测，每朵花统计100个花粉粒，共统计1000个花粉粒看其花粉萌发情况。

    1.4统计方法与数据分析

    采用Excel进行分组统计，用SAS 8.0进行方差分析和Duncan多重比较法分析数据。

    变异系数CV—a／p（a表示标准差，μ表示总体平均数）。

    2  结果与分析

    2.1  花粉活性检测结果

    利用离体萌发法对不同组合的父本花粉活性进行。

    由表1可以看出，肇东苜蓿为父本的花粉粒萌发率均高于其它3个品种作父本时的花粉粒萌发率，且干瘪率的变异系数较大，说明干瘪率在不同品种间存在差异。肇东苜蓿为父本与Pleven6杂交和与另外两个品种杂交相比花粉粒萌发率差异显著，其中与Beza87杂交花粉粒萌发率差异极显著；Pleven6、WL323、Beza87为父本与肇东苜蓿杂交，花粉粒萌发率差异不显著。

    2.2  结荚率及每荚种子数的变异程度

    所有组合均获得杂交种子，由表2可以看出，不同组合结荚率由高到低为1>5>2>3>6>4，平均结荚率为32.6%。肇东苜蓿与WL323的正反交结荚率均高于其它杂交组合，说明肇东苜蓿与WL323亲和性较好。不同组合间结荚率及每荚种子数变异系数较大，说明结荚率和每荚种子数在不同组合间是存在差异的；肇东苜蓿与其它3种国外苜蓿杂交，正交结荚率均大于反交结荚率，这与花粉粒活性鉴定的结果正好相反，因此需要对花粉萌发率、结荚率和每荚种子数做方差分析，观察不同组合的差异显著性，以及父母本对杂交组合结荚率的影响。

    2.3  父本对结荚率及每荚种子数的影响

通过不同父本与同一母本（肇东苜蓿）的杂交表现研究了父本效应。可以看出，3个父本的花粉活性差异极显著，父本对杂交结荚率影响显著，对杂交组合每荚种子数的影响不显著。

    2.4母本对结荚率及每荚种子数的影响

    通过不同母本与同一父本（肇东苜蓿）的杂交表现研究了母本效应。由表4可以看出，同一父本的花粉活性差异不显著，3个母本对杂交结荚率影响显著，对杂交组合每荚种子数的影响极显著。

     2.5不同杂交组合方差分析

    通过表2中杂交结果的数据，对结荚率进行方差分析，结果表明各杂交组合间结荚率差异极显著，所以需进一步比较各处理组合的平均数。在此用新复极差测验(Duncan)对杂交组合间结荚率的平均数进行多重比较。

    可以看出，肇东苜蓿与WL323的正反交结荚数差异显著，与Pleven6的正反交结荚数差异不显著，与Beza87的正反交结荚数差异极显著。Pleven6作父本与以Beza87为父本杂交的结荚数之间差异显著，与以WL323为父本杂交的结荚数差异极显著，而以WL323、Beza87为父本结荚数之间差异不显著；以肇东苜蓿作父本与 WI。323为母本杂交与以Beza87和Pleven6两个品种为母本杂交结荚数差异极显著，而以Plev- en6、Be'za87为母本时结荚数差异不显著。

    由此说明，不同品种间花粉活性差异极显著，父母本对杂交结荚率均有显著影响，而杂交组合每荚种子数受母本影响较大，以肇东苜蓿为母本结荚率均高于反交结果，而花粉活性鉴定结果表明肇东苜蓿花粉萌发率高于其它3个品种，因此推测杂交结荚率受母本影响较大。不同组合杂交结荚率差异显著，这可能与亲本之间的配合力和亲缘关系等有关，需要做进一步的研究。

    3结论与讨论

    苜蓿是同源四倍体，其杂合程度很高，云锦凤认为苜蓿为常异交植物，其天然异交率在25%～75%[8]，卢欣石等认为苜蓿晶种内的遗传变异大于品种间的遗传变异，李世雄等认为绝大多数苜蓿品种的种子产量及产量构成因素的品种内变异大于品种间变异。该研究中，花粉粒活性检测结果表明，品种内的花粉粒活性差异大于品种间的差异，与前人研究结果相符。

    在自然条件下，不同品种苜蓿的花粉活力和数量变化范围较大，且同品种不同部位的花粉活力和数量变化范围较大，该研究中不同苜蓿品种花粉生活力为42.67%～65.38%，而姜华等在兰州地区测定不同品种苜蓿花粉生活力为50.56%～80.76%，高于该研究的苜蓿花粉生活力，除了品种原因外，同一品种在不同地区种植花粉生活力也不相同，该试验的WL323苜蓿花粉生活力（萌发率）为43.21%，而姜华在兰州测定WL323的花粉生活力为58.4%。

    苜蓿每荚种子数直接影响苜蓿种子产量，张文淑等调查，每个荚果中种子4～8粒，吴素琴、张自和在宁夏地区对紫花苜蓿Baralfa 32 IQ每荚种子数进行调查，荚内种子粒数范围在1～19粒，平均数为7.3，而该试验的苜蓿杂交荚内种子粒数范围在1～5粒，平均数为3.38，低于吴素琴调查结果，表明杂交对荚内种子数量有影响。

该试验中各组合间结荚率的变化范围是16.3%～51.7%，通过分析表明，父母本对苜蓿杂交的结荚率均有显著影响，由此可知，父母本对杂交亲和性的影响都较大，在进行杂交育种时，不仅要注重对母本的选择，也要加强对父本的选择。  

不同紫花苜蓿的杂交种在一定的情况下可表现出杂种优势，Riday H等认为不同基因型或不同种群的苜蓿杂交可表现出显著的特殊配合力效应。因此需要对杂交后代做进一步研究，探讨4个苜蓿品种的配合力和杂种优势问题。

刘凤歧1，张月学1，唐凤兰1，陈  晶2，韩微波1．刘杰淋1，尚  晨1(1．黑龙江省农业科学院草业研究所，黑龙江哈尔滨150086;2.哈尔滨师范大学生命科学与技术学院，黑龙江哈尔滨150025)

黑龙江农业科学2012(2):93～96