水稻生产中为了保证水稻的高产，往往不可避免地需要使用各种农药。据报道，在农药的使用过程中，真正起作用的仅占喷施量的0．1%，其余99．9%的农药都分散于环境中，中国每年受农药污染的农田面积达到6．67 ×

因此，在大米的进出口中，世界各主要农业大国都对大米的农药残留制定了严格的限量标准。研究大米中农药残留的检测方法，既是保障人类健康的需要，又是促进进出口贸易的需要。

国内外对大米中农药的检测方法大多针对出入境检验的需要，会集中检测几十种甚至数百种农药，但很多农药在水稻生产过程中是不会使用的，农药种类的增多会增加前处理提取的负担，使得过程繁琐，往往也很难保证每个农药提取的效率［2］。结合农业生产实际，有针对性地检测基质中可能使用的农药种类，可以大幅度提高检测的工作效率，节省人力和财力。目前对农药的检测方法包括气相色谱、液相色谱和各种色质联用仪［3-12］。但是，普通的色谱方法往往为了排除杂质峰的干扰，须进行大量复杂的前处理，有机溶剂成本高、毒性大，复杂的净化过程有时又影响方法的回收率［3-7］; 利用气质联用仪有时又需要进行衍生化［8-9］。而开发液质联用方法［2，11-12］检测水稻中多农药残留，不仅可以在简化前处理过程的同时减少大量杂质峰的干扰，而且可以利用特征离子的优势进行多残留检测，特别是保留时间和特征离子可以双重定性，既提高方法的检测效率又提高方法的准确性。本试验以农田常用的几种农药在水稻中的残留为检测对象，建立大米中多农药残留液相色谱三重串联质谱检测方法。

1 材料与方法

1．1 仪器和试剂

安捷伦Agilent Technologies 1200 SL Series 液相色谱串联G6410A 质谱仪，同时配置G1948B 电喷雾离子ESI 源。甲醇、乙腈等均为色谱纯，购自德国Merck 公司。甲酸为色谱纯，购自美国TEDIA 公司。水取自Milli-Q 超纯水系统。

1．2 溶液配制

农药标准品吡蚜酮( Pymetrozine ) 、氧化乐果( Omethoate) 、敌百虫( Trichlorphon) 、啶虫脒( Acetamiprid) 、乐果( Dimethoate) 、多效唑( Paclobutrazol) 、烯唑醇( Diniconazole)、喹硫磷( Quinalphos) 和甲基阿维菌素苯甲酸盐( Emamectin-benzoate) 均购自农业部环境保护科研检测所，标准品保存于－20 ℃的冰箱中。称取各农药纯品0. 01 g( 根据标样含量折算至0. 01 g 有效成分) ，用乙腈配置各农药单标1 000 μg /ml，储存于冰箱中备用。

1．3 样品前处理

将大米用粉碎机粉碎，称取5. 0 g( 精确到0. 1 g) 样品于50. 0 ml 离心管中，加入0. 1%( 体积分数) 冰醋酸-乙腈20. 0ml，盖上离心管盖，漩涡混匀，超声波处理10 min，振荡提取2 h。加入3 g 无水硫酸镁和1 g 无水乙酸钠，漩涡混匀。4 000 r /min离心5 min，取出上清液，50 ℃水浴氮气吹干。加入含0. 1%甲酸的甲醇0. 5 ml，漩涡30 s，加入0. 1%甲酸的超纯水0. 5 ml，漩涡30 s，加入氨基柱填料0. 04 g，漩涡混匀，过0. 22 μm 的滤膜到进样小瓶中，供液质测定。

1．4 色谱、质谱条件与工作指标

色谱条件: 色谱柱为ZORBAX SB-C18 Narrow-Bore 2．1mm ×150 mm 5-Micron，柱前使用1 cm 长C18预柱，流动相为乙腈∶ 水∶ 甲酸( 体积比为50．0∶50．0∶0. 1) ，流速为0. 4ml /min，进样量5 μl。

质谱条件: 电喷雾ESI 源，雾化气为氮气，压力为172kPa; ; 干燥气为氮气，流速为10 L/min，温度为350 ℃; 毛细管电压为4 000 V; 质谱为多反应监测( Multiple reaction monitoring，MRM) 模式，碰撞气为高纯氮气，根据具体农药分子特性确定传输区电压和碰撞能量。

1．5 标准曲线与线性范围

用空白样品提取液配制各农药系列浓度在10 ～1 000ng /ml 内作标准曲线。将测得的农药浓度和农药峰面积作直线回归，求曲线回归方程和相关系数。

1．6 回收率与变异系数的测定

把各农药标准储备液的标准工作液加入5. 0 g 大米空白中，制得对应浓度分别为5. 0 μg /kg、50. 0 μg /kg、100. 0μg /kg的3 个添加浓度水平，放置1 h，按照方法1．3 和1．4进行，1 d 之内样品重复3 次，共重复3 d。以峰面积定量，求回收率和变异系数。

2 结果

2．1 色谱峰

试验中液相的流速为0. 4 ml /min，质谱部分的干燥气温度设定为350 ℃，流速10 L/min。结果显示，空白样品MRM图基本没有基质干扰峰出现，添加农药样品MRM 色谱图中共显示有9 个峰，与添加的农药种类数一致。

2．2 标准曲线、检测限与回收率

农药标样采用基质匹配法，削弱了基质效应的影响。各农药的标准曲线结果显示，9 种农药在10 ～1 000 ng /ml 内呈良好的线性相关，r2 ＞0. 99。

9 种农药在5. 0 μg /kg、50. 0 μg /kg、100. 0 μg /kg添加水平的回收率为70% ～110%，相对标准偏差小于20%，回收率和相对标准偏差符合相应标准的要求。方法的最低检测限均为1. 5 μg /kg，最低定量限均为5. 0 μg /kg。

3 讨论

液质联用方法检测水稻中多农药残留，不仅可以在简化前处理过程的同时，减少大量杂质峰的干扰，而且可以利用特征离子的优势进行多残留检测，特别是保留时间和特征离子可以双重定性，既提高方法的检测效率又提高方法的准确性。

本试验前处理采用了固相分散萃取净化方式，节省了大量的时间和有机溶剂的消耗。为进一步确保由于简单提取而可能导致的无色杂质对质谱的污染，本试验在液相部分加入了一个C18预柱，并且每进100 个左右样品更换新的预柱，以维护质谱的干净同时提高工作效率。并且为了目标分析物在质谱的电喷雾离子源( ESI) 部分能较好地离子化，前处理部分采用含0．1%甲酸的乙腈水混合溶剂定容，以增加加氢峰的可能。

本试验中参考了目前农药检测领域中较为热点的一种快速、简便、价格低廉、高效、安全的分析方法—QuEChERS( Quick，Easy，Cheap，Effective，Rugged，Safe) 方法［17］，并作了一定的改进: 采用酸性乙腈提取; 减少过滤的步骤，加入离心的方式; 去除固相萃取过程，采用固相分散萃取。方法的改进提高了检测速度，减少了有机溶剂的消耗，简化了操作过程，简单易行。

建立的农药残留检测方法简单快速、选择性好、准确度和精密度高，能有效消除基质干扰，可以用于大米中农药残留的检测。该方法的关键是找出各种农药合适的母离子和子离子，并确定定量子离子，在简化前处理的同时又能保护仪器。

沈燕， 刘贤进， 余向阳， 王冬兰， 孙星( 江苏省农业科学院农业部食品安全监控重点开放实验室，江苏南京210014)

江苏农业学报，2012，28( 1) : 222 ～224